Información y criterios para la preparación y envío de muestras para análisis por espectrometría de masa

Todo envío de muestras debe ser previamente acordado. Además, las muestras provenientes del exterior deberían acompañarse de un aviso simultáneo (por correo electrónico o por fax) que permita el seguimiento de su arribo.
La mayoría de las muestras de proteínas pueden enviarse dentro de un micro-tubo de centrifugación tipo Eppendorf de 0.5 o 1.5 mL. Esto incluye a las bandas de geles 1D o a spots recortados a partir de geles 2D (en muchos casos, muestras humedecidas en la solución de decoloración). También las muestras de proteínas liofilizadas o desecadas por SpeedVac pueden enviarse de este modo.
Antes de concentrar/liofilizar soluciones con péptidos y proteínas debe tenerse en cuenta que hay una serie de sustancias cuya presencia es deletérea o directamente impide la realización de medidas de masa por MALDI TOF, en particular sales inorgánicas, compuestos iónicos y sales amortiguadoras de pH en alta concentración, polietilenglicol y detergentes iónicos. Por lo que se recomienda eliminar estas sustancias interferentes por procedimientos adecuados (desalado por gel filtración o por HPLC en fase reversa, diálisis, precipitación, etc.) antes de concentrar o liofilizar la muestra. El uso de sales volátiles, como bicarbonato, formiato o acetato de amonio es altamente recomendable. De ser necesario, considerar el uso de “octyl glucoside” (o detergentes similares) que resulta más inocuo para esta aplicación.
Todos los procedimientos involucrados en la preparación y manejo de geles para corridas electrofóreticas (productos químicos de partida, preparación de soluciones, preparación de las muestras, operaciones de tinción, revelado y decoloración, corte de bandas o de spots de proteínas, etc.) deben hacerse en lugares libres de contaminación con partículas de polvo del ambiente, preferentemente en una cámara con flujo laminar. Debe recordarse que proteínas de tipo queratina (y otras…) forman parte importante de esa contaminación ambiental y que si se incorporasen por alguna manipulación inapropiada a las muestras concentradas destinadas a medidas por MALDI TOF, en la mayoría de los casos impedirán el análisis de la proteína de interés.
Muchos de los protocolos y procedimientos de tinción de geles de uso frecuente son compatibles con el procesamiento posterior necesario para obtener muestras de proteína destinadas a medidas de masa por MALDI TOF. Sin embargo, esto debe ser comprobado previamente para cada protocolo experimental. En particular, los procedimientos de tinción con plata que involucran el empleo de glutaraldehído no son compatibles con un análisis posterior por espectrometría de masa. También se debe tener la precaución de no re-utilizar ninguna bandeja o cubeta de plástico previamente empleada con soluciones concentradas de albúmina, leche en polvo u otras proteínas.



		Información y criterios para la preparación y envío de muestras para análisis por espectrometría de masa Todo envío de muestras debe ser previamente acordado. Además, las muestras provenientes del exterior deberían acompañarse de un aviso simultáneo (por correo electrónico o por fax) que permita el seguimiento de su arribo. La mayoría de las muestras de proteínas pueden enviarse dentro de un micro-tubo de centrifugación tipo Eppendorf de 0.5 o 1.5 mL. Esto incluye a las bandas de geles 1D o a spots recortados a partir de geles 2D (en muchos casos, muestras humedecidas en la solución de decoloración). También las muestras de proteínas liofilizadas o desecadas por SpeedVac pueden enviarse de este modo. Antes de concentrar/liofilizar soluciones con péptidos y proteínas debe tenerse en cuenta que hay una serie de sustancias cuya presencia es deletérea o directamente impide la realización de medidas de masa por MALDI TOF, en particular sales inorgánicas, compuestos iónicos y sales amortiguadoras de pH en alta concentración, polietilenglicol y detergentes iónicos. Por lo que se recomienda eliminar estas sustancias interferentes por procedimientos adecuados (desalado por gel filtración o por HPLC en fase reversa, diálisis, precipitación, etc.) antes de concentrar o liofilizar la muestra. El uso de sales volátiles, como bicarbonato, formiato o acetato de amonio es altamente recomendable. De ser necesario, considerar el uso de “octyl glucoside” (o detergentes similares) que resulta más inocuo para esta aplicación. Todos los procedimientos involucrados en la preparación y manejo de geles para corridas electrofóreticas (productos químicos de partida, preparación de soluciones, preparación de las muestras, operaciones de tinción, revelado y decoloración, corte de bandas o de spots de proteínas, etc.) deben hacerse en lugares libres de contaminación con partículas de polvo del ambiente, preferentemente en una cámara con flujo laminar. Debe recordarse que proteínas de tipo queratina (y otras…) forman parte importante de esa contaminación ambiental y que si se incorporasen por alguna manipulación inapropiada a las muestras concentradas destinadas a medidas por MALDI TOF, en la mayoría de los casos impedirán el análisis de la proteína de interés. Muchos de los protocolos y procedimientos de tinción de geles de uso frecuente son compatibles con el procesamiento posterior necesario para obtener muestras de proteína destinadas a medidas de masa por MALDI TOF. Sin embargo, esto debe ser comprobado previamente para cada protocolo experimental. En particular, los procedimientos de tinción con plata que involucran el empleo de glutaraldehído no son compatibles con un análisis posterior por espectrometría de masa. También se debe tener la precaución de no re-utilizar ninguna bandeja o cubeta de plástico previamente empleada con soluciones concentradas de albúmina, leche en polvo u otras proteínas.
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